Pourquoi le tampon HEPES 7365-45-9 est utilisé dans la détection de la lactate déshydrogénase

La lactate déshydrogénase (LDH), comme l' une des enzymes clés de la voie de glycolyse intracellulaire, subit des changements dans son activité dans diverses conditions pathologiques.La mesure précise de l'activité de la LDH n'est pas seulement d'une grande importance pour la recherche scientifique de baseLe choix du tampon approprié est l'un des facteurs clés pour assurer l'exactitude des résultats des tests au cours de ce processus.

L'acide 4-hydroxyéthylpipérazine éthanosulfonique (Puffer HEPES), en tant que tampon biologique largement utilisé, devient progressivement le composant principal des kits de détection de la lactate déshydrogénase.Cet article analysera en détail, sous de multiples perspectives, pourquoi le tampon HEPES est utilisé dans la détection de la lactate déshydrogénase.

Puffer HEPES

1, Caractéristiques de base du HEPES

Le HEPES est un tampon zwitterionique contenant des groupes aminés et des groupes carboxyle, avec la formule moléculaire C8H18N2O4S.et solide inodore avec une bonne solubilité dans l'eau et une bonne stabilité chimique.

La plage de tamponnage du HEPES est comprise entre 6,8 et 8 pH.2, et pour la détection de la LDH, son environnement catalytique se situe généralement dans cette plage de pH.Le HEPES peut maintenir efficacement la stabilité des conditions de réaction et assurer la précision de la mesure de l'activité enzymatiqueEn outre, la capacité de tamponnage de l'HEPES n'est pas affectée par la concentration de CO2, ce qui est particulièrement important pour la culture cellulaire et les réactions biochimiques en milieu ouvert.

2, Application du HEPES dans la détection de la LDH

L'HEPES, en tant que composant principal du kit de détection de la lactate déshydrogénase, joue plusieurs rôles.avec le réactif I contenant le tampon biologique HEPES, complexe d' ions métalliques, substrat de réaction de LDH, tensioactif, activateur d' enzyme LDH, conservateur et eau; le réactif II est constitué de HEPES, de nicotinamide adénine dinucléotide oxydé NAD+, tensioactif,conservateurEn ajoutant séparément différents composants fonctionnels, les conditions de réaction peuvent être mieux contrôlées et les interférences causées par la turbidité de l'échantillon lui-même peuvent être réduites.

3, Améliorer la précision et l'efficacité de la détection

Bonne stabilité: l'effet tampon fourni par le HEPES assure la stabilité du pH tout au long du processus de détection, ce qui est crucial pour la mesure de l'activité enzymatique.

Haute précision: en optimisant la formule et en appliquant des mesures strictes de contrôle de la qualité, des résultats cohérents sont garantis pour chaque test.

Large gamme de tests linéaires: capables de couvrir un large éventail de niveaux d'activité de la LDH, de s'adapter à différents types d'échantillons et de répondre à différents besoins cliniques.

Forte capacité anti-interférence: résiste efficacement à l'influence de facteurs externes tels que les changements de température ou les impuretés de l'échantillon, assurant ainsi l'authenticité des données.

Pas besoin de pré dilution: simplifie les étapes expérimentales, raccourcit le temps de détection, particulièrement adapté aux environnements cliniques occupés.

4Principe de réaction et mesure

Le processus de réduction catalysée par LDH de l'acide pyruvique en acide L-lactique est une réaction réversible, et lorsque la concentration d'acide lactique est élevée, elle favorise la réaction inverse, c'est-à-direla synthèse de l'acide pyruvique à partir de l'acide lactique. Sous des conditions de pH appropriées maintenues dans le tampon HEPES, l'acide L-lactique réagit avec le NAD+ pour produire de l'acide pyruvique et du NADH. Le NADH présente une absorbance caractéristique à une longueur d'onde de 340 nm,ce qui signifie que l'activité de la LDH peut être quantifiée en surveillant les changements d'absorbance.

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