Sélection de la concentration du tampon HEPES 7365-45-9 en culture cellulaire

Le maintien d'une valeur de pH stable pendant la culture cellulaire est l'un des facteurs clés pour assurer une croissance et une prolifération cellulaires saines.Puffer HEPES) est largement utilisé dans le domaine de la culture cellulaire comme tampon d'ions hydrogène important en raison de sa capacité à fournir des effets tamponnants stables sur une large plage de pH (6,8 à 8,2).Cet article explorera en détail la sélection des concentrations de HEPES en culture cellulaire, visant à fournir des conseils pratiques aux chercheurs.
 

 
Application du HEPES dans la culture cellulaire
 
La fonction principale du HEPES en culture cellulaire est de maintenir la stabilité du pH du milieu de culture.l'entrée de dioxyde de carbone de l'air dans le flacon de culture peut entraîner une augmentation de la valeur du pH du milieu de cultureL'ajout de HEPES peut prévenir efficacement ce phénomène et maintenir le pH dans une plage appropriée.

 

 
Poudre de HEPES
 
Déterminer la concentration appropriée de HEPES
 
1Différences entre les lignées cellulaires
 
Il existe des différences dans la demande de concentration de HEPES entre les différentes lignées cellulaires.il peut être nécessaire de déterminer la concentration optimale par des expériences de gradient de concentrationIl est possible de régler un gradient de concentration de 2 mM par rapport à la plage conventionnelle de 10 à 25 mM pour observer l'état de croissance, le taux de prolifération,et l'activité métabolique des cellules à différentes concentrations, afin de trouver la concentration HEPES la plus appropriée pour la lignée cellulaire.
 
2L'influence de la composition du milieu de culture
 
L'HEPES interagit avec d'autres systèmes tampons dans le milieu de culture, tels que les systèmes tampons au bicarbonate.la quantité optimale de HEPES ajoutée peut également varier en conséquenceLa recherche a montré qu'augmenter la concentration de HEPES à 30 mM tout en réduisant la concentration de bicarbonate peut mieux maintenir la stabilité du pH pour la croissance cellulaire et favoriser la prolifération cellulaire.
 
3L'influence de la température
 
La température est un facteur important affectant le taux métabolique des cellules, qui à son tour affecte la demande de pH des cellules.Le HEPES peut exercer un effet tampon efficaceCependant, pour certaines cellules spéciales, telles que certaines cellules d'insectes, leur température de culture optimale peut être inférieure.Les changements de température peuvent modifier l'activité enzymatique et les voies métaboliques dans les cellules., ce qui peut entraîner des changements dans le taux de production d'acide ou d'alcali.
 
Méthodes visant à améliorer l'effet tampon de l'HEPES
 
1. Optimiser la fréquence de changement de fluide
 
Les changements fréquents de fluide peuvent entraîner la dilution du HEPES avant que sa capacité de tampon ne soit pleinement utilisée.Il est essentiel d' étudier les taux métaboliques des différentes lignées cellulaires et de déterminer la fréquence appropriée de l' échange de liquide.Pour les cellules dont le métabolisme est lent, l'intervalle entre les changements de fluide peut être prolongé de manière appropriée afin d'assurer l'effet tampon durable et stable du HEPES dans le milieu de culture.réduire l'impact des changements de fluide sur l'environnement de croissance cellulaire.
 
2Réduire les pertes par HEPES
 
Au cours du stockage et de l'utilisation du milieu de culture, des facteurs tels que l'exposition à la lumière et la température élevée peuvent entraîner la dégradation du HEPES.il est recommandé de conserver le milieu de culture dans des flacons en verre brun afin d'éviter l'influence de la lumière sur le HEPESDans le même temps, lors de la configuration du milieu de culture, le principe de l'utilisation et de la préparation sur place doit être respecté afin de réduire la perte de HEPES causée par le stockage à long terme,s'assurer qu'il maintient une concentration efficace tout au long du processus de culture cellulaire, et améliorer l'effet tampon.
 
 

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