Pourquoi les agents réducteurs doivent-ils être ajoutés au tampon Tris 150-25-4?

Dans le domaine des sciences biologiques, en particulier dans l'étude de la chimie et de la biochimie des protéines, le maintien de la stabilité et de l'activité des protéines est crucial.En tant qu'exécuteur principal des activités de la vie, l'intégrité de la structure et de la fonction des protéines a une incidence décisive sur divers processus de vie dans les cellules.Les protéines sont facilement affectées par divers facteurs environnementauxParmi eux, l'oxydation est un facteur important,qui peut détruire la structure et la fonction des protéines en oxydant les résidus d'acides aminés tels que la cystéine.

Tris tampon

Pour résoudre ce problème, les scientifiques utilisent généralement des solutions tampons contenant des agents réducteurs, tels que:Tris tamponLe tampon Tris est largement utilisé en raison de son excellente capacité de tamponnage et de sa stabilité,mais l' utilisation de tampon Tris seul ne suffit pas à protéger efficacement les protéines contre les dommages oxydatifsPar conséquent, l'ajout d'agents réducteurs est devenu une étape importante.

Trois agents réducteurs courants dans le tampon Tris
 

1. Dithiothreitol (DTT)

Le DTT est un agent réducteur organique de petites molécules couramment utilisé, et l'ajout de DTT au tampon Tris peut empêcher l'oxydation des protéines.c'est une molécule linéaire qui se transforme en une structure cyclique hexagonale contenant des liaisons disulfures après oxydationDans l'expérience, la concentration de DTT est généralement de 5 à 10 mM pour s'assurer que la concentration de l'agent réducteur est beaucoup plus élevée que la concentration de protéine dans le tampon,protégeant ainsi la protéine des dommages oxydatifs.

2. tri (2-carboxyéthyl) phosphine (TCEP)

Le TCEP est un agent réducteur de thiol avec des applications étendues dans la recherche en chimie des protéines et en protéomique.mais n'a pas non plus besoin d'être éliminé dans certaines réactions de liaison croisée de thiolEn outre, le TCEP a une bonne stabilité, mais son prix est relativement élevé.

3. le mercaptoéthanol (β-mercaptoéthanol, BME)

Le mercaptoéthanol est un agent réducteur couramment utilisé qui peut protéger les groupes thioliques libres sur les protéines de l'oxydation, évitant ainsi l'agrégation ou la dénaturation des protéines.la capacité réductrice du mercaptoéthanol est relativement faible, et une supplémentation régulière est nécessaire pour assurer les résultats expérimentaux.il peut être ajouté à la solution de la piscine et diffusé en gouttelettes par sa volatilité pour assurer une réduction soutenue.

Emballage du produit

Précautions d' utilisation

Le tampon Tris est généralement préparé à température ambiante, mais les agents réducteurs tels que le DTT et le mercaptoéthanol sont facilement dégradés à température ambiante.si ces agents réducteurs sont ajoutés au tamponEn outre, des agents réducteurs peuvent être ajoutés au tampon Tris avant l'expérience pour assurer de bons résultats.

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