Mettre en évidence:
Acide 4-péperazine-diéthanosulfonique
, PIPES tampon
, 5625-37-6
Méthode de préparation 1,4-pépérazine-diéthane-sulfonique tampon d'acide 5625-37-6
L'acide diethanosulfonique de pipérazineLa réserve PIPESpossède une variété de systèmes tampons, parmi lesquels la solution tampon Transformation Buffer (également appelée solution TB) peut être utilisée pour préparer des cellules compétentes à haut rendement.
Competent state refers to a special physiological state in which cells (or bacteria) can take up DNA molecules from the surrounding environment and are not easily broken down by restriction endonucleases in the cellCertaines bactéries sont naturellement compétentes, comme Bacillus subtilis, et certaines sont artificiellement compétentes, comme Escherichia coli.Le traitement des cellules réceptrices par une méthode spéciale peut modifier la perméabilité de la membrane cellulaire., ce qui en fait une cellule compétente qui permet aux molécules porteuses d'ADN étranger de passer.
Poudre de tuyaux
Matière première compétente pour la solution de tuberculose - PIPES en poudre
Préparation du tampon de transformation:
| 1 |
Préparer de l'acide diéthanosulfonique piperazine PIPES 3,0 g 10 ml, CaCl2·2H2O 2,2 g 15 ml, KCl 18,6 g 250 ml |
| 2 |
Ajouter 950 ml d'eau, régler le pH à 6,7-6,8 avec 5N KOH* faible pH insoluble |
| 3 |
Ajouter 10,9 g de MnCl2·4H2O avec une concentration finale de 55 mM pour obtenir 1 litre |
| 4 |
Stérilisation par filtre, conservation à 4 degrés |
La transformation de cellules bactériennes compétentes utilise la méthode du chlorure de calcium.37 degrés pendant la nuit jusqu'à ce qu'une seule colonie grandisse.Choisissez une colonie d'un diamètre de 1 à 3 mm pour inoculer le milieu SOB dans un flacon Erlenmeyer de 250 ml ou 80 ml.Arrêtez la culture lorsque la dose de 600 est d' environ 0..4 à 0.8, refroidir dans de l'eau glacée à 4 degrés pendant 10 minutes, centrifuger à 300 tr/min pendant 15 minutes, récupérer les bactéries après avoir retiré le surnaturant, suspendre dans 1/3 de volume de solution glacée de tuberculose,et centrifugez à nouveau pendant 10 minutes pour récupérer les bactériesSuspendre avec 1/12,5 vol de TB, ajouter du DMSO avec une concentration finale de 7%, puis refroidir pendant 10 minutes dans des aliquotes de 0,1-1 ml, et conserver directement dans de l'azote liquide ou à -80°C.
Dans la solution de tuberculose d' Escherichia coli en suspension, les principaux composants comprennent le tampon PIPES et le chlorure de calcium pour transformer les cellules en cellules compétentes.Il convient de noter que cette méthode est adaptée pour E. coli qui ne contiennent pas de plasmides, et ne convient pas pour les grands plasmides.la DSO600 optimale de différentes souches bactériennes est également différente, et doit être ajustée en fonction de différentes expériences.
Il existe de nombreuses méthodes pour préparer des cellules compétentes pour la tuberculose, et l'efficacité des différentes méthodes peut être différente, et les souches ou types de cellules applicables peuvent également être différents.Le PIPES produit par Desheng est un réactif en poudre, et des solutions compétentes pour la tuberculose peuvent être préparées en fonction des différents besoins.
Emballage du produit
Desheng Biochemical est un fabricant spécialisé danstampons biologiquesLes produits tampons comprennent le Tris ((Hydroxymethyl) Aminométhane, l'acide 4- ((2-Hydroxyethyl)-1-Piperazine-Sulfonique, l'acide 3-Cyclohexylaminopropanesulfonique, etc., tous avec une pureté supérieure à 99%,Si vous en avez besoin, les amis d'affaires peuvent nous contacter.!
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