L'HEPES est une sorte de tampon amphotérique non ionique.Puffer HEPESest l'acide 2 - [4 - (2-hydroxyéthyl) - 1-piperazinyl] éthanosulfonique.4Dans cette condition, le couvercle du flacon de culture cellulaire doit être serré pour empêcher la dispersion dans l'air d'une petite quantité de carbonate nécessaire au milieu de culture.
La plupart des milieux de culture contiennent du phénol rouge comme indicateur de pH. Les milieux de culture acides sont jaune orange et les milieux de culture alcalins sont rouge foncé.Le HEPES est coûteux et peut être toxique pour certaines cellules à fortes concentrationsDans la pratique, ce n'est pas si simple.Le CO2 et le bicarbonate dissous sont également très importants pour une bonne croissance cellulaire.
Il existe deux façons d' utiliser HEPES.
(1) L'HEPES peut être directement ajouté au milieu de culture préparé selon la concentration requise, puis filtré pour enlever les bactéries.régler le pH à 7.2 avec du LN NaOH après dissolution, filtration et utilisation après stérilisation.
(2) Avant utilisation, 99 ml de milieu de culture ont été ajoutés à 1 ml de milieu de stockage et la concentration finale était toujours de 10 mmol/ L. Méthodes: 23,8 g d' HEPES ont été dissous dans 90 ml d' eau double distillée,ajusté au pH 7.5- 8.0 avec du LN NaOH, puis dilué à 100 ml avec de l'eau, filtré et stérilisé, sous-emballé dans de petits flacons (2 ml/ flacon), conservé à 4 °C ou - 20 °C.
L'acide 4-hydroxyéthyl piperazine éthanesulfonique n'a pas d'effet toxique sur les cellules.Lorsque la concentration finale est de 10 à 50 mmol/l et que le milieu de culture contient 20 mmol/l d' HEPESIl peut être utilisé comme tampon biologique, tampon de réaction, tampon de préhybridation et tampon d'hybridation pour la séparation et l'analyse de composants nucléaires d'ARN,et pour l'ARN et le t4rna.
La qualité de la biologie moléculaire est utilisée pour l'étiquetage de l'ARN3' à l'extrémité avec le livre chimique de la t4rna ligase, la séparation et l'analyse des composants tampons de réaction,tampon de préhybridation et composants tampons d'ARN nucléaireAdhésion cellulaire à cellule, culture d'agrégation cellulaire à court terme, tampon de nettoyage des tissus et des cellules.
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