Quand utiliseriez-vous un tampon de Hepes ?

Le nom complet dePuffer HEPESest l'acide 4-hydroxyéthylpipérazine éthanosulfonique, le CAS est de 7365-45-9, le HEPES est souvent utilisé dans les tampons biologiques, gamme de pH tampon: 6,8-8.2, le principal composant du tampon hepes est l'acide sulfurique éthylique hydroxyéthylpipérazine, le HEPES est un tampon amphotérique, qui est soluble dans l'eau et ne forme pas de complexes stables avec les ions métalliques.Il a une bonne capacité de tamponnage dans la gamme de pH de 7.2 à 7.4Il est principalement utilisé dans les kits de diagnostic biochimique, les kits d'extraction d'ADN/ARN et les kits de diagnostic PCR.

Utilisé dans une variété de réactions biochimiques:

1. HEPESle tamponest souvent utilisé comme réactif tampon dans le milieu de culture cellulaire de divers types d'organismes, pour l'adhésion cellulaire, l'agrégation et la culture cellulaires à court terme, et comme tampon pour le nettoyage des tissus et des cellules;

2Dans la recherche sur les protéines, le PIPES est souvent utilisé comme composant et éluant du tampon de liaison dans la chromatographie par échange de cations;

3Dans la recherche sur l'ADN, le PIPES est utilisé comme tampon pour le phosphate de calcium et le système de formation des précipitations d'ADN, et comme tampon pour les expériences d'AFM et d'électroporation.

4En outre, le HEPES a une certaine interférence avec la réaction entre l'ADN et les enzymes de restriction, et il n'est pas adapté à la méthode de Lowry pour déterminer la teneur en protéines.

5. Le tampon HEPES est souvent utilisé dans la recherche d'organites et de protéines et d'enzymes très variables et sensibles au pH, ainsi que de kits de diagnostic biochimique,Ensembles d'extraction d'ADN/ARN et ensembles de diagnostic par PCR.

6. Le tampon de réaction, le tampon de pré-hybridation et le tampon d'hybridation pour séparer et analyser les composants nucléaires de l'ARN; utilisé pour l'ARN et l'ARNT4.Le grade de biologie moléculaire est utilisé pour étiqueter l'extrémité 3' de l'ARN avec l'ARN ligase T4, séparer et analyser les composants du tampon de réaction, du tampon de préhybridation et du tampon de hybridation de l'ARN nucléaire.

Poudre de HEPES

Questions liées au HEPES

1Le pH requis pour la plupart des cellules est de 7,2-7.4Les fibroblastes préfèrent un pH plus élevé (7,4-7,7), tandis que le passage des lignées cellulaires transformées nécessite une acidité.0 à 7.4) Puisque la plupart des fluides de culture sont tamponnés par le système du bicarbonate de sodium (NaHCO3) et du CO2,la concentration de CO2 dans la phase gazeuse doit être en équilibre avec la concentration de bicarbonate de sodium dans le fluide de cultureSi la concentration de CO2 dans la phase gazeuse ou dans l'air de l'incubateur est fixée à 5%, la quantité de NaHCO3 ajoutée dans la solution de culture est de 1,97 g/l; si la concentration de CO2 est maintenue à 10%,la quantité de NaHCO3 ajoutée à la solution de culture est de 3.95 g/l. Le capuchon du flacon de culture cellulaire ne doit pas être trop serré pour assurer l'échange de gaz;

2La valeur de pH de la solution de culture utilisant la paire tampon HCO3 et CO2 est instable et tend à être alcaline après stockage pendant une certaine période.Si le pH du fluide de culture change trop rapidement, le tampon HEPES peut être ajouté au fluide de culture à une concentration finale de 10 à 25 mM;

3. le HEPES est un tampon amphotérique, principalement utilisé dans la recherche biologique comme la phosphorylation oxydative, la synthèse des protéines dans un environnement stérile, la phosphorylation photosynthétique, la fixation du CO2, etc.;Le HEPES n'a pas d'effet sur les substrats de l'ionisation des métaux et convient à la transmission par microscopie électronique (TEM).; dans les milieux de culture cellulaire, l'avantage est qu'il peut maintenir une valeur de pH relativement constante lors d'une culture ouverte ou d'une observation cellulaire.ou en ajoutant du bicarbonate tampon (10-15mM) pour soulager la restriction de l'environnement de culture de CO2 à forte concentrationLe CO2 et le bicarbonate dissous sont également très importants pour une bonne croissance cellulaire.