Expérience de vérification d'effet d'inactivation des médias de transport de virus

Il y a deux types de médias de transport de virus supplémentaires dans le tube d'échantillonnage de virus, on est la solution inactivée de conservation de l'acide nucléique modifié de virus d'extraction lytique de protéine, et l'autre est l'entretien de l'activité in vitro de virus, son acide nucléique et l'antigène modifié basé sur le transport moyen accomplissent la solution non-inactivée de conservation. Pour les solutions inactivées de conservation, il est important d'inactiver des virus efficacement et d'empêcher l'infection secondaire.

Différent du type non-inactivé, le milieu inactivé de transport de virus est ajouté avec une forte concentration de sel de lysis, qui peut inactiver le virus efficacement et peut effectivement empêcher l'opérateur de l'infection secondaire. Mais il contient également les inhibiteurs de RNase, qui peuvent protéger l'acide nucléique viral contre la dégradation, de sorte qu'ils puissent être plus tard détectés par NT-PCR. L'effet d'inactivation est expérimentalement vérifié ci-dessous.

1. Matériaux de vérification d'inactivation

1 embryon de poulet de SPF (et haché à 10 jours de par lui-même)

2 tension infectieuse du virus IBV QXL87 de bronchite de poulet

3 salins normaux (0,9% NaCl), stérilisé à l'autoclave

4 solutions inactivées de stockage d'échantillon, 3 groupes.

5 kits d'extraction d'ARN

Le milieu de transport de virus inactive des virus

2. Méthodes expérimentales

1. Ajoutez la tension infectieuse préparée du virus QXL87 de bronchite de poulet à la solution de conservation, selon le rapport de 1 (solution virale) : 10 (solution de conservation), et ont placé la température ambiante à 18-26℃ pour 45min. Le fluide de virus a été inoculé dans des embryons de poulet de SPF, et le fluide allantoïque a été moissonné.

2. Inoculez le fluide allantoïque moissonné dans 1 dans 10 embryons de poulet de SPF de jours selon la méthode allantoïque d'inoculation de cavité. Chaque échantillon est inoculé avec 10 embryons de poulet, 0,1 mL/piece, placé dans un incubateur 37°C pour 144 h et jeté. Après 24 h des embryons morts de poulet, observez et enregistrez 24-44 h des décès d'embryon de poulet et du nombre d'embryons vivants malades après inoculation. Observation des lésions d'embryon de poulet, et la détection de l'acide nucléique de virus infectieux de bronchite de poulet sur le liquide allantoïque moissonné, se rapportant à la technologie diagnostique de bronchite infectieuse de poulet de GB/T 23197-2008, utilisant le kit d'extraction d'ARN pour extraire l'ARN, et employant la méthode en une étape droite-qPCR en temps réel pour la détection de virus.

Groupez 1/2/3 virus supplémentaire (100ul) + la solution de conservation (900ul) ; Le groupe 4 a ajouté le virus (100ul) + salin physiologique (900ul) ; Solution supplémentaire de conservation du groupe 5/6/7 (1000ul). Parmi eux, le milieu de transport de virus est dans trois groupes.

3. Résultats expérimentaux

Selon les résultats expérimentaux ci-dessus, les groupes 1, 2 et 3 ont été inoculés avec des agents de conservation contenant des virus, qui ont prouvé que les embryons de poulet se sont développés normalement ; le groupe 4 a été inoculé avec les lésions physiologiques virus-supplémentaires salines, et de poulet d'embryon ; les groupes 5, 6, et 7 ont été inoculés avec des agents de conservation, ne montrant aucune inhibition de croissance d'embryon de poulet. Ceci indique que la solution inactivée de conservation peut inactiver des virus.

Par cette expérience, nous pouvons finalement prouver que les trois séries d'échantillonage aléatoire de Desheng ont inactivé la solution de conservation peuvent effectivement inactiver le virus, et il n'exerce aucun effet inhibiteur sur la fonction physiologique normale des cellules. Par conséquent, ce milieu inactivé de transport de virus il peut efficacement inactiver de divers virus et extraire les acides nucléiques, qui convient aux expériences de détection de l'acide droite-qPCR nucléique. Naturellement, en raison de l'essai plus rapide, qui est directement employée pour la détection des patients a diagnostiqué avec la nouvelle couronne, peu de sociétés en Chine fera ainsi, parce qu'après tout, il n'est pas aussi facile obtenir nouveau virus de couronne !