L'application du tampon de HEPES
HEPES (4 (2-Hydroxyethyl) - acide 1-piperazineethanesulfonic) est un tampon zwitterionic, CAS No. 7365-45-9, ce tampon est généralement utilisé dans des expériences biochimiques pour ajuster le pH du système de réaction, tel que la solution de conservation de virus ou la solution de conservation de cellules. Il n'a aucun toxique sur des cellules, et maintient le pH pendant longtemps, il est toujours appliqué en milieu et cosmétiques de culture cellulaire.
HEPES est un tampon amphotère non ionique avec le bon pouvoir tampon dans la gamme de pH de 7.2-7.4. Sa caractéristique principale est de maintenir une valeur du pH relativement stable dans le milieu de culture ou l'observation de cellules. Sous ces normes, les chapeaux des flacons de culture cellulaire devraient être serrés étroitement pour éviter le carbonate exigé s'échappant dans l'air.
La manière de préparer le tampon de HEPES.
Le tampon de Hepes peut être ajouté directement dans le milieu de culture préparé avec la concentration exigée, suivie de stérilisation de filtre. Ajoutez 2,38 grammes de poudres de HEPES à chaque 1000ml de solution de culture, ajustez le pH sur 7,2 avec 1NNaOH après la dissolution, filtrez et le stérilisez avant d'appliquer, actuellement, la concentration de HEPES est 10mmol/L.
Ajoutant le dissolvant moyen de la culture cellulaire 99ml dans la solution 1ml courante, la concentration de HEPES est également 10mol/L.Below est la manière de préparer la solution courante de HEPES avec 1mol/L. D'abord, 23.8g de dissolution HEPES dans 90ml double-a distillé l'eau ; En second lieu, ajustant le pH sur 7.5-8.0 avec du NaOH 1N ; Troisièmement, composant à 100ml avec le titrant de l'eau ; En avant, filtrant et stérilisant avant emballé dans la bouteille 2ml ; Enfin stocké à 4℃ ou à -20℃.
Avec le point à hautes températures résistant et de fusion jusqu'à 200°C, la poudre de HEPES ne sera pas dégradée par l'autoclave. Selon la littérature appropriée, si le soluté de HEPES est exposé à la lumière ambiante pendant trois heures, le peroxyde d'hydrogène toxique (H2O2) sera produit. Par conséquent, 2 points doivent être prêtés l'attention à, une est les HEPES le soluté que doit être gardé à partir de la lumière pour pour ne pas affecter les résultats expérimentaux. Après avoir été configuré comme dissolvant, il devrait être stocké au °C 4 et être employé dans une courte période pour de meilleurs résultats. Un autre est généralement placé dans une salle sèche et ne peut pas directement être exposé pendant longtemps à la lumière du soleil.
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