Similitudes et différences entre Tris et Tris-HCL et Tris-EDTA

Tris : aminomethane de trimethylol

Trismethylaminomethane (Tris) est un composé organique avec la formule (HOCH 2) 3CNH 2. Tris est employé pour préparer des tampons dans des expériences de biochimie et de biologie moléculaire. Les tampons de TAE et de TBE (utilisés pour dissoudre les acides nucléiques) utilisés dans des expériences biochimiques exigent Tris, qui peut condenser avec des aldéhydes quand il contient des groupes aminés. L'amortissement des caractéristiques Tris est une base faible. À la température ambiante (25°C), son pKa est 8,1. Selon la théorie d'amortissement, la chaîne d'amortissement efficace du tampon de Tris est entre pH 7,0 et 9,2.

Le pH du soluté de la base de Tris est environ 1 0,5. Généralement, l'acide chlorhydrique est ajouté pour ajuster la valeur du pH sur la valeur désirée, et alors la solution tampon avec cette valeur du pH peut être obtenue. Mais en même temps, l'influence de la température sur le pKa de Tris devrait être commandée.

Puisque le tampon de Tris est une solution alcaline faible, l'ADN deprotonated dans une telle solution, améliorant de ce fait sa solubilité. Les gens ajoutent souvent l'EDTA à la solution tampon d'acide chlorhydrique de Tris pour faire le « tampon de TE ». Le tampon de TE est utilisé pour la stabilisation et le stockage d'ADN. Si la solution acide pH-ajustée est remplacée par l'acide acétique, alors le « tampon de TAE » (Tris/Acetate/EDTA) est obtenu, et s'il est remplacé par l'acide borique, alors le « tampon de TBE » (Tris/Borate/EDTA) est obtenu. Ces deux tampons sont utilisés dans des expériences d'électrophorèse d'acide nucléique.

Tris-HCL de 1 M (pH7.4, 7,6, 8,0)

Tris-HCL composant de la concentration 1M

Volume 1L de préparation

Méthode de préparation :

1. Pesez 121.1g Tris dans un becher 1L.

2. Ajoutez au sujet de 800ml de l'eau désionisée et remuez pour se dissoudre.

3. Ajoutez la quantité de HCL concentré suivant les indications de la table ci-dessous pour ajuster la valeur du pH requise.

HCL concentré par pH

7,4 au sujet de 70ml

7,6 au sujet de 60ml

8,0 au sujet de 42ml

4. Apportez la solution à 1 L.

5. Après stérilisation à hautes températures et à haute pression, stockez à la température ambiante.

Note : Permettez à la solution de se refroidir à la température ambiante avant d'ajuster la valeur du pH, parce que la valeur du pH de la solution de Tris varie considérablement avec la température. Quand la température augmente par 1°C, la valeur du pH de la solution diminue par environ 0,03 unités.

Tris-HCL de 1,5 M (pH8.8)

Tris-HCL composant de la concentration 1.5M

Volume 1L de préparation

Méthode de préparation

1. Pesez 181.7g Tris dans un becher 1L.

2. Ajoutez au sujet de 800ml de l'eau désionisée et remuez pour se dissoudre.

3. Ajustez le pH sur 8,8 avec du HCL concentré.

4. Apportez la solution à 1 L.

5. Après stérilisation à hautes températures et à haute pression, stockez à la température ambiante.

Note : La solution devrait être refroidie à la température ambiante avant d'ajuster la valeur du pH, parce que la valeur du pH de la solution de Tris varie considérablement avec la température,

Pour chaque augmentation 1°C de la température, le pH de la solution diminue par approximativement 0,03 unités.

Les avantages du tampon Tris-HCL sont :

① puisque la base de Tris est plus alcaline, vous pouvez employer ce système de tampon pour préparer une solution tampon avec un large éventail de valeurs du pH d'acide à alcalin ;

② peu d'interférence au processus biochimique, aucune précipitation avec du calcium, ions de magnésium et ions de métaux lourds.

Les inconvénients sont :

Le ① la valeur du pH de la solution tampon est considérablement affecté par la concentration de la solution, la solution tampon est diluée dix fois, et le changement de la valeur du pH est plus grand que 0,1 ;

Le ② l'effet de température est grand, et le changement de température a une grande influence sur la valeur du pH de la solution tampon, à savoir : △pKa/℃=-0.031, par exemple : le pH de la solution tampon à 4℃=8.4, puis la valeur du pH à 37℃= 7,4, ainsi lui doit être préparé à la température d'utilisation, le tampon Tris-HCL préparé à la température ambiante ne peut pas être employé à 0 ℃ | ℃ 4.

③ il est facile d'absorber le CO2 dans le ciel, ainsi le tampon préparé devrait être étroitement scellé.

Le ④ cette solution tampon interférera certaines électrodes de pH, ainsi utilisez une électrode compatible avec la solution de Tris.

La solution de Tris peut absorber le dioxyde de carbone de l'air, attention de salaire au scellage pendant le stockage, si vous avez besoin de la stérilité, vous peut ajouter l'azoture de sodium.

TE est la solution tampon de Tris-EDTA (10mM Tris, EDTA de 1mM, pH7.4 pH7.6 pH8.0).

Réactifs utilisés généralement de biologie moléculaire pour la dissolution d'ADN.

Préparez le tampon 10×TE (pH7.4, 7,6, 8,0)

Concentration composante : Tris-HCL de 100mM, EDTA de 10mM

Volume de préparation : 1L

Méthode de préparation :

1. Mesurez la solution suivante et la placez dans un becher 1L.

tampon Tris-HCL de 1M (pH7.4, 7,6, 8,0) 100 ml

EDTA de 500 millimètres (pH8.0) 20ml

2. Ajoutez au sujet de 800ml de l'eau désionisée au becher et mélangez également.

3. Après ajustement du volume sur 1L, stérilisez à la haute température et à la haute pression.

4. Stockez à la température ambiante.