Plusieurs facteurs qui doivent être considérés avant la réaction de chimiluminescence

L'analyse de chimiluminescence devient de plus en plus due populaire à sa sensibilité superbe de détection. Utilisé généralement sont le luminol, l'isoluminol, et les esters d'acridine. Dans l'analyse chimique, des réactions de chimiluminescence sont employées pour détecter des analytes directement en covalence marquées avec des composés de chimiluminescence. Le déclenchement d'un label chimioluminescent pour une réaction luminescente produit d'un signal pour la détection de l'analyte. L'avantage de cette méthode est qu'il est plus simple et plus clair, et évite le besoin de plus grand, relativement les labels « collants ». Cependant, les facteurs pour choisir la réaction de détection, si c'est un label d'enzymes ou un label direct, et comment déterminer l'intensité de la lumière doivent être considérés avant de concevoir la réaction.

Enzyme marquant ou marquant direct ? La méthode commune de produire de la chimiluminescence est d'employer les enzymes marquées pour catalyser la réaction de chimiluminescence. Chaque label peut lancer les réactions multiples de chimiluminescence, tellement habituellement seulement une ou quelques labels/analytes d'enzymes doivent être incorporés. Le composé chimioluminescent est supérieur fourni comme enzyme/substrate pour assurer la cinétique de saturation. L'intensité de la lumière est une fonction linéaire de la quantité d'enzyme marquée. L'intensité, le taux d'émission de photons par seconde, est le produit de la conversion catalytique du substrat et de la vie du composé luminescent.

Le graphique de distribution d'intensité/temps de chimiluminescence inclut une première période de montée et prolonger la luminescence jusqu'au plateau ou au plateau faux. S'il n'y a aucune valeur stable de plateau, elle indique que le substrat est épuisé ou l'enzyme est inactivée. La détection de la chimiluminescence produite par des enzymes fournit la grande flexibilité dans le procédé de mesure. L'intensité de la lumière à tout moment passant par le clou peut être liée à la quantité d'enzyme. Si la vitesse est un type unique ou multipoint problème de pente de mesure, vous pouvez le mesurer dans la cloison croissante afin d'obtenir la sensibilité la plus élevée, cependant, il n'y a pas beaucoup de composés chimioluminescents appropriés. Les candidats appropriés doivent d'abord avoir certaines fonctions pour permettre la connexion avec d'autres molécules. D'une manière primordiale, une fois que l'étiquette est déclenchée, elle devrait émettre toute la lumière dans le temps le plus court possible.

Quand la chimiluminescence est graduellement émise sur une période de temps, les diminutions d'intensité de signal (photons/seconde), et lui est le meilleur pour déterminer le nombre optimal de labels de chimiluminescence sur les espèces à détecter basées sur l'expérience. Même si théoriquement plus d'étiquettes devraient fournir plus de photons, si les étiquettes sont espacées trop étroitement ensemble, un effet d'extinction se produira. La superficie et le nombre de groupes derivatizable (habituellement aminés ou de groupes de mercapto) fournissent d'autres restrictions. Dans la pratique, jusqu'à 10-20 labels peuvent être liés à une macromolécule. En outre, plus de labels sur la surface de la molécule obligatoire, plus le label interférera ses propriétés de liage plus vraisemblablement.

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