Les raisons du fond élevé du réactif TODB du nouveau Trinder

Dans l'utilisation dele nouveau réactif de Trinder TODB, le fond élevé est un problème courant qui affecte les résultats de détection, tandis que l'étanchéité insuffisante et le lavage incomplet des plaques sont des facteurs clés facilement négligés pendant le fonctionnement.Ces deux problèmes peuvent provoquer une augmentation anormale de la couleur de fond due à la liaison non spécifique et à l'interférence des substances résiduelles.Vous trouverez ci-dessous une analyse détaillée et une solution.

Fermeture insuffisante: force motrice "derrière les coulisses" derrière des combinaisons non spécifiques

La fonction de l'étape de blocage est de bloquer les sites non liant à la surface du support de réaction (comme une plaque d'essai d'immunosorbent liée à l'enzyme).les substrats, des conjugués enzymatiques et d'autres composants du réactif TODB s'adsorberont aléatoirement sur la surface du support, formant un signal de couleur sans la participation de la substance cible,augmentation directe de la valeur de fond.

raison spécifique

1- Temps d'étanchéité insuffisant: en général, l'étanchéité nécessite une position à 37 °C pendant 60 minutes ou à température ambiante pendant 120 minutes.les sites actifs à la surface du support ne peuvent pas être complètement couverts par la solution de blocage (par exemple BSA), la poudre de lait écrémé), et les zones hydrophobes qui ne sont pas bloquées adsorberont activement les composants protéiques dans le système de réaction TODB, ce qui entraînera une coloration de fond.

2. trop faible concentration de solution de blocage: lorsque les ingrédients efficaces de la solution de blocage sont insuffisants, par exemple lorsque la concentration initiale de 5% d' ASB tombe à 1%,un film protecteur étroit ne peut pas se former entre les moléculesLes composants tels que la peroxidase du raifort dans le réactif TODB s'attacheront à la paroi interne du pore de la plaque par des interactions hydrophobes.et des réactions non spécifiques se produiront avec le substrat pendant la réaction.

3- défaillance de la solution étanche: si la solution étanche est congelée et fondue à plusieurs reprises, ou stockée plus longtemps que sa date de péremption,les composants protéiques à l'intérieur se détérioreront et perdront leur fonction de scellement, résultant en de nombreux sites "exposés" sur la surface du support, qui deviennent la source de signaux de fond.

Le lavage incomplet du carton: l'"effet d'empilement" des substances résiduelles

La fonction principale du lavage des assiettes est d'éliminer les réactifs libres non liés (tels que les anticorps non liés, les substances précurseurs de TODB).Les substances résiduelles continueront à participer au développement de la couleur dans les réactions ultérieures., permettant l'accumulation d'interférences de fond.

Raison spécifique

1. Trop peu de lavages de plaques: les essais conventionnels nécessitent de laver la plaque 3 à 5 fois.et la réaction va réagir avec le substrat TODB, ce qui entraîne un développement supplémentaire de la couleur.

2. Trop de résidus de détergent: après le lavage de la planche, si les trous sur le papier absorbant ne sont pas inversés et secs, il y aura plus de résidus de détergent dans chaque trou,et certains composants à l'intérieur perturberont l'équilibre du système de réaction TODBDans le même temps, les conjugués enzymatiques résiduels se diffuseront dans les trous adjacents avec le liquide, provoquant une contamination croisée et soulevant le fond.

3. il y a un problème avec la machine à laver: lorsque l'aiguille de la machine à laver est bloquée ou que la pression est insuffisante,les coins des trous de la plaque deviendront des zones qui ne peuvent pas être lavésLe réactif TODB résiduel se cristallise après séchage et participe à la réaction lorsqu'il est à nouveau dissous, ce qui entraîne un assombrissement de la couleur du fond local.

Résumé: Les détails opérationnels déterminent l'efficacité du contrôle de fond

Bien que l'étanchéité et le lavage des plaques soient des étapes de routine, leur qualité affecte directement le niveau de fond des réactifs TODB.il est recommandé d'adopter la méthode de "prolongation du temps d'étanchéité+augmentation du nombre de lavages de plaques", combinée à des mesures telles que la vérification de la concentration de la solution d'étanchéité et l'étalonnage régulier de la machine à laver,qui peuvent réduire de manière significative la valeur de fond et assurer l'exactitude des résultats de détection.

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