Optimisation de la méthode de DESSUS pour la détermination des acides gras libres

Pour la détermination des acides gras libres dans le sérum ou le plasma, on utilise généralement la méthode photométrique des enzymes chromogènes de Trinder.la détection des acides gras est affectée par de nombreux facteurs, et la méthode de détection doit être optimisée et améliorée pour améliorer la précision de la détection.

Principe FFA de détection du chromogène trinder:

La méthode de détection comporte trois étapes de réaction: les acides gras libres (FFA ou NEFA) réagissent avec l'excès de CoA pour générer de l'acyl-CoA sous l'action de l'acétyl-CoA synthase (ACS),et réagit avec l'oxygène sous l'action de l'acétyl-CoA oxydase (ACO)La réaction génère 2,3-trans-énoyl CoA et peroxyde d'hydrogène, et la réaction de Trinder est utilisée pour détecter le peroxyde d'hydrogène, et la teneur en FFA peut être obtenue.

Le TOPS est recommandé pour la détermination de la FFA du chromogène

Problèmes dans les méthodes de détermination et d'optimisation des FFA:

1L'excès de coenzyme A dans la réaction interférera avec la réaction du peroxyde d'hydrogène et du chromogène de Trinder, rendant le résultat global du test faible.Le N-éthylmaléimide (NEM) peut être utilisé pour éliminer l' excès de coenzyme A.La stabilité du NEM est très affectée.

2L'acétyl CoA synthétase et l'acétyl CoA oxydase utilisées ont des spécificités de substrat différentes pour différents acides gras libres, ce qui entraîne des différences dans les résultats de détermination.Différentes sources d'enzymes ont des spécificités de substrat différentes pour les acides gras libres avec des longueurs de chaîne C différentesIl y a 6 types d'EFF dans le sérum humain, et seules les enzymes ayant une spécificité élevée pour elles ne peuvent pas faire de différence dans les résultats de mesure.

3En raison de l'influence de la CoA sur la réaction, la plage linéaire des résultats des données est étroite.et il doit être excessif, donc une interférence est requise. Moins de chromogène. SCEP n'est pas interféré par la coenzyme A mais est instable. ADOS et TOPS sont moins interférés par la CoA, et TOPS a un coefficient d'absorption molaire plus élevé,donc c'est un meilleur substrat chromogène.

4. Ajouter le complexe de sulfhydryl DTNB et MIT pour réduire la quantité de NEM. Le groupe de sulfhydryl de DTNM peut réagir avec le groupe de sulfhydryl de CoA pour éliminer l'interférence au chromogène.Une petite quantité de MIT peut éliminer le groupe sulfhydryl de CoA et agit également comme un conservateurGrâce à l'utilisation du chromogène TOPS, l'interférence du CoA peut être complètement éliminée et la stabilité grandement améliorée.

Si vous avez des exigences plus élevées pour les résultats de détermination de l'AFE, vous pouvez choisir un kit de meilleure qualité basé sur les points ci-dessus.Desheng produit les matières premières pour les kits de détermination des FFA et autres indicesSi TOPS est utilisé pour déterminer directement l'AFE, en raison de la faible stabilité de la solution, il est recommandé de préparer une solution de travail pour une utilisation immédiate avant utilisation.