Dans l'essai biochimique relatif des préparations enzymatiques, en plus de mesurer le contenu, la concentration, et la stabilité de divers indicateurs à examiner, il y a également des indicateurs de détecter l'activité enzymatique, telle que le sucre de sang, les lipides de sang, et la créatinine. Pour des indicateurs tels que l'oxydase de transaminase et de sarcosine, l'activité enzymatique doit être mesurée.
D'une façon générale, l'activité enzymatique est l'activité de la catalyse d'enzymes, qui implique un paramètre cinétique de l'enzyme-le Michaelis kilomètre constant, qui signifie la concentration du substrat (s) quand la réaction enzymatique atteint la moitié de la vitesse maximale (VM). La vitesse de la réaction enzymique n'est pas uniforme, non linéaire comme la concentration, mais le nombre de mètres à Changshu est constant, qui est une quantité physique caractéristique de l'enzyme. La constante de Michaelis des changements d'enzymes avec le type mesuré de substrat, la température de réaction, le pH et la concentration ionique. Dans les mêmes conditions, n'importe ce que la concentration de l'enzyme est, la concentration du substrat exigé est identique quand le taux de réaction maximum est atteint.
Méthode de mesure de constante de Michaelis d'oxydase de sarcosine :
Préparez une solution de sarcosine avec une concentration de 1,0, de 2,0, de 3,0, de 4,0, de 5,0, de 6,0, de 7,0, de 8,0, de 9,0, de 10.0mmo1/L avec le tampon Tris-HC1 de pH 8,0, et réagissez à 37°C pendant 5 minutes déterminent l'activité initiale d'oxydation de SOX à différentes concentrations en sarcosine. Le taux de réaction V et 1/V sont obtenus. Selon la méthode de cartographie réciproque de double de Lineweaver-Burk, avec 1 [s] comme abscisse et 1/V comme ordonnée, les kilomètres et le Vmax de SOX à la sarcosine ont été calculés.
Conclusion de constante de Michaelis d'oxydase de sarcosine :
La constante de Michaelis peut être employée pour juger la spécificité de l'enzyme. Plus la valeur de kilomètre sont petite, plus l'affinité entre l'enzyme et le substrat est grande, et plus le substrat est comme substrat naturel de l'enzyme approprié. Selon l'essai et le calcul de l'oxydase de sarcosine ci-dessus, l'équation de Michaelis est y=1232.5X+8.7012 et le coefficient de corrélation est 0,9947 : les valeurs calculées de kilomètre et de Vmax de SOX à la sarcosine sont 141.6mmol/L et 0.115mmol, respectivement/(L.min).
Il convient noter que l'oxydase SOX de sarcosine de différentes sources a une certaine différence dans la constante de Michaelis de la sarcosine. Par exemple, la valeur de kilomètre de SOX de Corynebaclerium à la sarcosine est 21mmol/L. Puisque la constante de Michaelis n'a rien à faire avec la concentration de l'enzyme et le type d'enzyme, ce point peut également être employé pour l'identification ou la détermination d'enzymes. Desheng biochimique se concentre sur le champ de la détection biochimique, et fournit un grand choix de préparations enzymatiques comprenant SOX, l'estérase de cholestérol, l'oxydase de glucose, etc.
