Le choix du bon tampon biologique pour l'expérience peut être une tâche difficile. Il y a beaucoup d'options disponibles (Hepes, balais, Tris, BRI-Tris, etc.), qui peuvent facilement causer la confusion.
Après la compréhension de ces défis, Desheng a préparé une liste courte pour votre référence en choisissant des sels de tampon pour la recherche :
1. Chaîne de tampon
Chaque réactif de tampon a une gamme de pH avec le pouvoir tampon le plus fort. Ce pouvoir tampon est habituellement déterminé par le pKa du réactif de tampon. Vous devez choisir un tampon avec une valeur de pKa près du milieu de la gamme désirée (typiquement, on lui recommande d'utiliser un tampon avec une valeur de pKa qui est au moins à moins d'une unité de pH de la cible pH).
La gamme applicable de pH de chaque tampon
2. changements de pH pendant l'expérience
Considérant à l'avance si la valeur du pH peut augmenter ou la diminution pendant l'expérience est critique à la sélection des tampons. Si vous pensez le pH augmentera pendant l'expérience, vous doit choisir un tampon avec un pKa légèrement plus haut que la valeur optimale au début de l'expérience. L'opposé est également vrai : si vous pensez le pH diminuera, choisit un tampon avec un pKa inférieur.
3. Concentration en tampon
La concentration en tampon doit être ajustée pour avoir le pouvoir tampon suffisant pour le système expérimental. Généralement si la concentration en tampon est si basse, le pH de la solution ne peut pas être stabilisé. Réciproquement, si la concentration est trop haute, le tampon est susceptible d'affecter l'expérience. Généralement, on lui recommande d'employer une concentration plus haut que 25mM.
Pour les systèmes dans lesquels l'échange de proton d'hydrogène n'est pas en activité, une concentration de 25-100mM est généralement recommandée. Pour des systèmes où l'échange de proton peut se produire, on lui recommande d'employer une concentration 20times en tampon plus haut que la concentration molaire des protons échangés.
4. Changement de température
Vous devez placer le pH de la solution tampon selon la température à laquelle l'expérience sera exécutée. La température affecte directement le pKa du tampon, et ainsi le pH et le pouvoir tampon du système. Cette situation peut être critique dans des systèmes biologiques, où des concentrations d'ions d'hydrogène précises sont exigées pour que le système de réaction fonctionne à l'efficacité maximum.
Le pKa de quelques tampons (tels que des TUYAUX) est moins sensible aux changements de température, mais à d'autres options (telles que TRIS, AS, ROBINETS, TES, ou Tricine) davantage sont affectés par ces changements.
La figure ci-dessous montre le changement approximatif de pKa selon la température de Desheng Biobuffer :
Variation approximative de pKa température Desheng Biobuffer
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