Comment choisissez-vous les tampons biologiques pour la chromatographie ?

La chromatographie est souvent utilisée pour la séparation et la purification des protéines en laboratoire. Dans ce processus, les variations de pH sont liées à la capacité de séparation du système.Si le pH du solvant est proche de pKa, par exemple, de petits changements de pH peuvent fortement affecter la rétention et, par conséquent, les résultats de séparation. Un tampon doit être ajouté au système afin de contrôler le PH de phase mobile,Comme la rétention des composés ionisants est particulièrement sensible à la variable PH.

Selon la littérature pertinente en chromatographie, nous avons constaté que, bien que lesBase de Triset MES sont souvent les meilleurs choix pour cette technique, d'autres tampons ont également été utilisés dans la chromatographie par échange de cations, la chromatographie par échange d'anions,chromatographie liquide à hautes performances (HPLC) et autres techniques similairesVous trouverez ci-dessous les 10 meilleurs tampons pour référence.

1) La réserve BIS-TRIS

Plage de pH appropriée: 5,8 à 7.2

PKA (25°C): 6°C.46

Poids moléculaire: 209,2 g/mol

Utilisé comme tampon pendant la chromatographie par échange anionique (Préoccupations: plusieurs composants d'un système chromatographique peuvent rivaliser avec ce tampon pour se lier au métal)

2) Puffer du BES

Plage de pH appropriée: 6,4 à 7.8

PKA (25°C): 7°C ou plus09

Poids moléculaire: 213,2 g/mol

Utilisé comme tampon de liaison et éluant dans la chromatographie par échange de cations / comme tampon dans la chromatographie par filtration au gel

3) tampon biciné

Plage de pH appropriée: 7,6 à 9.0

PKA (25°C): 8°C.26

Poids moléculaire: 163,2 g/mol

Utilisé comme tampon de phase mobile et éluant dans la chromatographie par échange de cations

4) La réserve CAPS

Plage de pH appropriée: 9,7 à 11.1

PKA (25°C): 10°C.40

Poids moléculaire: 221,32 g/mol

Utilisé comme tampon de liaison et éluant dans la chromatographie par échange de cations

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5) tampon HEPES

Plage de pH appropriée: 6,8 à 8.2

PKA (25°C): 7°C ou plus48

Poids moléculaire: 238,3 g/mol

Utilisé comme tampon de liaison et éluant dans la chromatographie par échange de cations dans une méthode de dialyse inverse en deux étapes pour les essais de libération in vitro

6) tampon MES

Plage de pH appropriée: 5,5 à 6.7

PKA (25°C): 6°C.10

Poids moléculaire: 195,2 g/mol

Utilisé comme tampon dans l'électrochromatographie capillaire, la chromatographie par filtration par gel, la chromatographie à colonne de phosphocellulose, la chromatographie par interaction hydrophobe et la chromatographie par échange de cations

7) tampon MOPS

Plage de pH appropriée: 6,5 à 7.9

PKA (25°C): 7°C ou plus14

Poids moléculaire: 209,3 g/mol

Utilisé comme tampon pour la purification des protéines en chromatographie

8) Puffer des tuyaux

Plage de pH appropriée: 6,1 à 7.5

PKA (25°C): 6°C.76

Poids moléculaire: 302,37 g/mol

Utilisé comme tampon dans la chromatographie par échange de cations, il doit être utilisé à des concentrations plus faibles en raison de sa forte résistance ionique et de la dépendance de la concentration à pKa.Et un tampon dans la chromatographie de la phosphocellulose pour purifier les protéines des microtubules

9) tampon TAPS

Plage de pH appropriée: 7,7 à 9.1

PKA (25°C): 8°C.40

Poids moléculaire: 243,28 g/mol

Utilisé comme tampon dans la chromatographie planaire pour séparer les colorants et dans la chromatographie d'échange ionique pour la purification enzymatique14

10) tampon Tris

Plage de pH appropriée: 7,5 à 9.0

PKA (25°C): 8°C.06

Poids moléculaire: 121,14 g/mol

Utilisé comme tampon et éluant dans la chromatographie par échange anionique et dans l'électrochromatographie capillaire en raison de sa faible mobilité ionique

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