Comment les esters d'Acridinium marquent dans la détection

Principe de étiquetage d'ester d'acridinium de substrat de chimiluminescence en réactifs diagnostiques dans l'immunoessai de chimiluminescence, nous marquons la protéine d'anticorps avec de l'ester d'acridine au début, de sorte que l'analyte puisse être détectée après la réaction immunitaire. Dans ce cas, comment il est très critique de marquer l'anticorps. On s'est largement avéré que des sels d'acridine et des composés relatifs sont les labels chimioluminescents très utiles, surpassant des radio-isotopes dans la stabilité, la spécificité de label, et la sensibilité de détection. L'ester d'acridine-NHS, aussi nom en tant qu'ester de succinimide d'acridine, boîte réagit avec des groupes aminés primaires des protéines. Dans des conditions alcalines, NHS est substitué en tant que groupe partant et la protéine forme un lien stable d'amide avec de l'ester d'acridine. Après que la réaction ait été accomplie, le sel excédentaire d'acridinium a été enlevé par une colonne dessalante. En présence du peroxyde d'hydrogène alcalin, acridine-marqué des protéines peut émettre la lumière sans catalyse enzymatique.

Par conséquent, l'addition de la solution d'excitation fait libérer le système de réaction les photons à environ 430 nanomètre immédiatement, et la concentration en protéine peut être détectée en comptant le nombre de photons avec un luminometer standard. Puisque ce processus de luminescence est complété d'ici 2 secondes, l'échantillon doit être placé directement devant le détecteur de photons à l'intérieur du photomètre. Des protéines, les polypeptides, les anticorps, et les acides nucléiques peuvent tout être marqués avec des esters d'acridine.

Ce qui devrait être noté pour le réactif de chimiluminescence dissout l'ester de succinimide d'acridine avec DMF strictement anhydrousstrictly anhydre pour empêcher l'ester d'acridine d'être hydrolysée. Et il devrait être stocké dans un joint sec à -20°C si non utilisable. Différent de l'ester traditionnel d'acridine, la structure de l'ester de succinimide d'acridine a été modifiée pour augmenter l'obstacle stérique et pour augmenter la résistance d'hydrolyse. Elle peut être stable à la solution tampon de pH à la température ambiante avec pH 7,0.

Si l'acide carboxylique d'acridine sans - NHS, il est nécessaire d'ajouter un agent de condensation tel qu'EDCI, etc., afin d'avoir une réaction d'accouplement à une protéine groupe-contenante d'amine. L'hydrazide d'acridine, contenant le groupe d'animés libre, convient à l'accouplement direct de l'acide nucléique de polysaccharide ou du groupe contenant des protéines d'aldéhyde à l'extrémité de l'hydrazide d'acridine.

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