Company News About Le lysis bufferCAS7365-45-9 de HEPES est employé pour extraire la protéine nucléoplasmique
HEPES est l'acide 4 hydroxyethylpiperazine-ethanesulfonic (acide de N'-a-hydroxythylpiperazine-N'-ethanesulfanic), une poudre en cristal blanche, le tampon d'ions d'hydrogène, qui peut commander une gamme constante de pH pendant longtemps. La gamme de tampon efficace est pH6.8-8.2. Utilisé généralement pour préparer le tampon de lysis d'extraction de protéine, le tampon de culture cellulaire, etc.
La constante de dissociation de HEPES est 7,5. Si équimolaire le mélange de HEPES et de son Na-HEPES, le pH de la solution est 7,5. Généralement, une concentration molaire fixe de HEPES est préparée d'abord, et alors le pH est ajusté sur la valeur spécifique avec une base forte (NaOH généralement utilisé généralement). Ici, le NaOH sert seulement à fournir l'OH. Il est également possible d'employer d'autres bases fortes telles que le KOH. Quand la différence de pH est grande, employez le NaOH concentré. Pour régler avec précision, employez le NaOH dilué. Si le solide de NaOH est ajouté directement, l'erreur est trop grande, et quand le NaOH est exothermique dissous et le changement de la température peut affecter l'exactitude de l'électrode de pH.
Préparation de tampon de lysis de HEPES :
| Solution A de lysis : | Solution B de lysis : | ||
| HEPES | 10mmol/L, pH7.9 | HEPES | 20mmol/L, pH7.9 |
| KCl | 10mmol/L | NaCl | 420mmol/L |
| Mgcl2 | 1.5mmol/L | Mgcl2 | 1.5mmol/L |
| DTT | 1mmol/L | DTT | 0.5mmol/L |
| 甘油 | 5% | glycérine | 25% |
| EDTA | 0.2mmol/L | EDTA | 0.2mmol/L |
| NP-40 | 1% | ||
| PMSF (ajoutez avant emploi) | 1mmol/L | PMSF (ajoutez l'après utilisation) | 0.5mmol/L |
| aprotinin | 3mg/L | aprotinin | 5mg/L |
| leupeptin | 3mg/L | leupeptin | 5mg/L |
| pepstainA | 2mg/L | pepstainA | 3mg/L |
Étapes :
1. Rassemblez les cellules dans un tube de PE et une centrifugeuse (4000r/min, 5min, 4 degrés).
2. Lavez trois fois avec PBS, les centrifugez comme ci-dessus, jetez le surnageant.
3. Ajoutez le μl 100 du tampon A, incubez sur la glace pour 10 minute, centrifugez (14000 r/min, 1 minute), et jetez le surnageant.
4. Resuspendez le granule dans 60 microlitres du tampon B, mélangez bien, centrifugeuse sur la glace pour 30min, la centrifugeuse (14000r/min, 15min, 0 degrés), rassemblez le surnageant et jetez le granule.
Parmi eux, le rôle du lysate A est principalement employé pour sortir les protéines cytoplasmiques et les protéines de membrane, le lysate B est employé pour sortir les protéines nucléaires, NP-40 est un agent tensio-actif et un détergent, son rôle est tous deux qu'il détruit la membrane cellulaire (douce), et peut combiner avec la protéine sortie pour empêcher la précipitation, ainsi plus de la protéine cytoplasmique et la protéine de membrane peut être enlevée après que le surnageant soit enlevé par centrifugation dans la première étape. Après que la protéine nucléaire soit extraite, elle peut être dialysée avec le lysate A pour 2h et être combinée pour l'IP ; ou dilué avec d'autres solutions et remplacé par les tubes à centrifuger concentrés pour l'IP ou d'autres expériences.
Les matières premières principales des réactifs diagnostiques in vitro de Desheng sont : 1. tampon Tris, BICINE, HEPES, PAC, BALAIS, ROBINETS, EPPS, MOPSO, TUYAUX, PEP de BRI ; 2. luminol chimioluminescent de réactifs, isoluminol, ester DMAE-NHS, ester NSP-DMAE-NHS, sel NSP-SA, sel NSP-SA-NHS, hydrazide NSP-SA-ADH, ester ME-DMAE-NHS d'acridine d'acridine d'acridine d'acridine d'acridine d'acridine ; 3. Les réactifs TOOS, DESSUS, AGITATIONS, ADPS, ALPES, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS de nouveau Trinder ; 4. le gel de séparation d'Anti-irradiation pour des additifs de tube de collection de sang, héparine de sodium, l'héparine de lithium, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, favorisent le coagulant, la poudre de coagulation, etc. en outre, il produit également les médias et le carbomer 940/980 de transport de virus. Amis bienvenus à venir pour acheter.
