Puffer HEPESest de l'acide 4-hydroxyéthylpipérazine-éthanesulfonique (acide N?? a-hydroxyéthylpipérazine-N?? éthanesulfanique), poudre cristalline blanche, tampon des ions hydrogène, capable de contrôler une plage de pH constante pendant une longue période.La plage de tampon efficace est de pH 6,8-8.2. Utilisé couramment pour préparer le tampon de lysis d'extraction de protéines, le tampon de culture cellulaire, etc.
La constante de dissociation du HEPES est 7.5Lors d'un mélange équimolar de HEPES et de ses Na-HEPES, le pH de la solution est de 7.5Généralement, une concentration molaire fixe d'HEPES est préparée en premier, puis le pH est ajusté à la valeur spécifiée avec une base forte (généralement utilisé NaOH).Le NaOH sert uniquement à fournir de l'OH. Il est également possible d'utiliser d'autres bases fortes telles que KOH. Lorsque la différence de pH est grande, utilisez du NaOH concentré. Pour l'ajustement fin, utilisez du NaOH dilué.l'erreur est trop grande, et lorsque le NaOH est dissous, l'exothermie et le changement de température peuvent affecter l'exactitude de l'électrode de pH.
Préparation de tampon de lyse HEPES:
| Solution de lyse A: |
Solution de lyse B: |
| HEPES |
10 mmol/L, pH 7.9 |
HEPES |
20 mmol/L, pH7.9 |
| KCl |
10 mmol/l |
NaCl |
420 mmol/l |
| MgCl2 |
1.5 mmol/l |
MgCl2 |
1.5 mmol/l |
| DTT |
1 mmol/l |
DTT |
0.5 mmol/l |
| 甘油 |
5% |
glycérine |
25% |
| EDTA |
0.2 mmol/l |
EDTA |
0.2 mmol/l |
| NP-40, pour une période de deux ans |
1% |
|
|
| PMSF (ajouter avant utilisation) |
1 mmol/l |
PMSF (ajouter après utilisation) |
0.5 mmol/l |
| l'aprotine |
3 mg/l |
l'aprotine |
5 mg/l |
| leupéptide |
3 mg/l |
leupéptide |
5 mg/l |
| Pépstéine |
2 mg/l |
Pépstéine |
3 mg/l |
Les étapes:
1Les cellules sont collectées dans un tube EP et centrifugées (4000 r/min, 5 min, 4 degrés).
2Laver trois fois avec du PBS, centrifuger comme ci-dessus, jeter le supernatant.
3. Ajouter 100 μl de tampon A, incuber sur glace pendant 10 min, centrifuger (14000 r/min, 1 min) et éliminer le supernatant.
4. ré-suspendre le granulé dans 60 microlitres de tampon B, bien mélanger, centrifuger sur glace pendant 30 min, centrifuger (14000 r/min, 15 min, 0 degré), recueillir le supernatant et jeter le granulé.
Parmi eux, le lysate A est principalement utilisé pour libérer des protéines cytoplasmiques et des protéines de membrane, le lysate B est utilisé pour libérer des protéines nucléaires, le NP-40 est à la fois un tensioactif et un détergent,Il détruit la membrane cellulaire (légère)., et peut se combiner avec la protéine libérée pour prévenir les précipitations,la plupart des protéines cytoplasmiques et des protéines de membrane peuvent être éliminées après la supranatant est éliminé par centrifugation dans la première étapeAprès extraction de la protéine nucléaire, elle peut être dialysée avec du lysate A pendant 2 heures et combinée pour IP;ou dilué avec d'autres solutions et remplacé par des tubes centrifugeuses concentrés pour IP ou autres expériences.
Les principales matières premières des réactifs de diagnostic in vitro de Desheng sont les suivantes:Puffer biologique Tris, BICINE, HEPES, CAPS, MOPS, TAPS, EPPS, MOPSO, PIPES, PEP; 2. les réactifs chimioluminescents luminol, isoluminol, ester d'acridine DMAE-NHS, ester d'acridine NSP-DMAE-NHS, sel d'acridine NSP-SA,Salle d'acridine NSP-SA-NHSLes réactifs du nouveau Trinder sont les suivants: TOOS, TOPS, ADOS, ADPS, ALPS, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS;Gel de séparation anti-irradiation pour les additifs des tubes de prélèvement sanguin, l'héparine de sodium, l'héparine de lithium, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, favorisent le coagulant, la poudre de coagulation, etc. En outre, il produit également des médias de transport de virus et le carbomère 940/980.Bienvenue aux amis qui viennent acheter.
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