Nous ajoutons toujours des solutions tampon en effectuant l'électrophorèse d'ADN. Les solutions tampon utilisées généralement incluent TAE, qui contient Tris, acétate et EDTA, et TBE (Tris-borate-EDTA).
Quel est le rôle du tampon ? Une des fonctions du tampon est de maintenir le pH de l'écurie de solution. Quand un courant électrique traverse l'eau, une réaction d'oxydation se produit à l'anode pour produire de l'oxygène et des ions d'hydrogène ; une réaction de réduction se produit à la cathode pour produire des ions d'hydrogène et d'hydroxyde. L'électrophorèse à long terme rendra l'acide d'anode et la cathode alcalins. Un bon système de tampon devrait avoir un pouvoir tampon fort de maintenir le pH de la solution aux deux poteaux fondamentalement stable. Une autre fonction du tampon d'électrophorèse est de faire la solution ont une certaine conductivité pour faciliter la migration des molécules d'ADN. L'ADN est une substance alcaline qui est négativement - chargé pendant l'électrophorèse (le tampon pH=8) et émigre de l'électrode négative à l'électrode positive.
Un autre composant du tampon d'électrophorèse est EDTA, le but dont est chélater le plasma de Mg2+ et empêcher l'activation de la DNase pendant l'électrophorèse. Puisque les besoins de nucléase ces ions, EDTA peuvent tenir ces ions fermement pour éviter la dégradation acide nucléique. Mais il convient noter que les ions de magnésium sont également des cofacteurs de beaucoup d'enzymes, telles que des enzymes de restriction, des ADN polymérases, etc., ainsi la concentration de l'EDTA n'est généralement pas trop haute (habituellement environ 1mM).
Emballage de tampon de Desheng TRIS
Ainsi quels est-ce que sont meilleurs, TAE ou TBE ? Est-ce qu'en fait, que je devrais employer pour l'électrophorèse d'ADN ? Elle dépend vraiment du but de votre expérience. Jetons un coup d'oeil à la différence entre les deux.
1. La conductivité de TBE est plus grande que celle de TAE. Par conséquent, comparé à TAE, TBE est moins pour causer la surchauffe dans le réservoir d'électrophorèse. TBE est recommandé pour l'électrophorèse à long terme.
2. L'acide borique est un inhibiteur d'enzyme, ainsi si vous devez séparer l'ADN d'électrophorèse pour la réaction de digestion, on lui recommande d'employer TAE comme solution tampon d'électrophorèse
3. TBE est meilleur pour séparer de plus petits fragments. Pour des fragments plus petits que 300bp, la vitesse de migration dans TBE est plus rapide sur un gel d'agarose de 2%.
4. TAE convient à la séparation de grands fragments. Les fragments plus grands que 2kb émigrer plus rapidement dans TAE (en 0,8% gels d'agarose), et la vitesse est environ 10% plus rapides que dans TBE. TAE est plus approprié à la récupération du fragment d'ADN. Comparé à TBE, TAE a plus de haute résolution pour l'ADN supercoiled.
En résumé, la question de si TBE ou TAE est mieux ne peut pas être généralisée. Le système de tampon le plus approprié devrait être choisi selon le but expérimental spécifique. Le tampon biologique développé par Desheng a un grand choix de tampon, et seulement ce genre de tampon est employé. Le système peut préparer des tampons avec un large éventail de valeurs du pH, et peut fournir de diverses caractéristiques de l'emballage. Tampons d'achat chez Desheng biochimique, bienvenu pour consulter et acheter.
