Application de l'acide ethanesulfonic du hydroxyethylpiperazine 4 (HEPES) dans la détection de virus de la rage

4-Hydroxyethylpiperazine acide ethanesulfonic, abréviation anglaise HEPES, nombre de CAS : 7365-45-9, la couleur est la poudre cristalline blanche, la gamme de valeur du pH est 6.8-8.2, son application plus commune est comme valeur du pH biologique d'ajustement de tampon et son application dans des produits de soin pour la peau sont également aimées par les fabricants importants. Son application dans la détection de virus de la rage est souvent inconnue. Aujourd'hui, le rédacteur de Desheng popularisera la connaissance appropriée pour chacun.

Le virus de la rage généralement ne produit pas cytopathe (CPE) quand il se reproduit en cellules infectées, et il n'est pas facile de former des plaques dans des états conventionnels de culture. Bien que beaucoup de chercheurs ici et ailleurs aient établi l'érosion de virus de la rage sur des cellules d'embryon de poulet et des cellules BHK-21. Les méthodes de tache, mais ces méthodes exigent des conditions expérimentales strictes, ou les opérations sont compliquées et difficiles à maîtriser, qui affecte leur vulgarisation et utilisation. Après que les chercheurs aient constaté que 4 le hydroxyethylpiperazine HEPES acide ethanesulfonic peut augmenter l'effet pathogène du virus de la rage sur les cellules infectées, ils avaient l'habitude cette caractéristique de HEPES pour établir une méthode simple et rapide de plaque de HEPES pour le virus de la rage.

L'effet de HEPES sur la formation de la plaque de virus de la rage

Après que les cellules infectées aient été cultivées à 37°C pendant 3 à 5 jours, les cellules infectées traitées avec HEPES ont développé les changements cytopathes évidents au fond de la bâche. Après la souillure avec la violette en cristal, la formation de plaques claire a été vue, alors que le groupe infecté de cellules non traité avec HEPES ne montrait aucun signe de formation de plaques. Il n'y a aucun effet cytopathe, et aucune formation de plaques. Il peut voir que HEPES peut évidemment favoriser la formation de la plaque de virus de la rage sur des cellules de BHK.

Observation sur la sensibilité de la méthode de plaque de HEPES

La méthode de plaque de HEPES peut être employée pour le titre de l'infection de virus. Les expériences prouvent qu'il y a des relations évidentes de titre entre le nombre de plaques formées après l'infection de virus et la dilution de virus. Les titres contagieux de la même tension du virus de la rage CTN-BHK ont été mesurés par la méthode de plaque de HEPES et la méthode de souris. Les résultats ont prouvé que le nombre de plaques obtenues par la méthode de plaque de HEPES pour 4 déterminations consécutives s'est étendu de 1.0×10° à 4.0× 10*PFU/m1. Le titre d'infection obtenu par la méthode de souris pour 4 déterminations consécutives est 6.0~6.8log ou 1.0×10°~6.3×10/ml. Ceci prouve que la méthode rapide de plaque de HEPES a la même sensibilité que la méthode de souris.

Avantages de la méthode de plaque de HEPES

Utilisant la tension du virus de la rage CTN-181 et la tension de CTN-BNK pour étudier la méthode de titration de titre d'infection, les résultats prouvent que HEPES peut induire et augmenter l'effet pathogène du virus canin sur les cellules infectées. Quand le virus infecte les cellules, elles sont cultivées à 37°C pour 3~5 juste pour ajouter 50~00mmol/L HEPES sur la couverture du milieu semi-solide de méthylcellulose le premier jour, tache avec la solution violette en cristal après 24 heures, et calculent le nombre de plaques par les yeux nus après séchage à la température ambiante. Comparé à la méthode de tache d'insecte rapportée dans la littérature précédente, cette méthode de plaque a les avantages de rapide, de simple, d'économique, de sensible et de facile à maîtriser.

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