Avantages du biobuffer HEPES dans la culture cellulaire

HEPES est une préparation biochimique importante dans l'industrie biochimique. On le considère l'un des tampons importants dans le domaine de la recherche biologique. Le nom chimique de HEPES est : L'acide de N-hydroxyethylpiperazine-1-ethanesulfonic, le caractère est la poudre cristalline blanche, est un acide faible, employé souvent en tant que le tampon zwitterionic et intermédiaire pharmaceutique dans l'industrie chimique organique. Il est souvent choisi comme tampon pour la culture cellulaire en raison de ses avantages :

Produits de l'emplacement et du tampon de Desheng

1. La capacité de décomposition de HEPES peut être augmentée avec l'augmentation de la température et être affaiblie avec la diminution de la température, mais comparé à d'autres tampons, sa constante de décomposition ne change pas beaucoup avec la température, qui fait HEPES le tampon devenir le tampon d'A que meilleur maintient la structure et la fonction de l'enzyme. Le tampon peut commander une gamme constante de pH pendant une plus longue période et n'exerce aucun effet toxique sur des cellules.

2. Le pH exigé pour la plupart des cellules est 7.2-7.4, HEPES a un bon pouvoir tampon dans cette gamme, mais la valeur du pH optimale varie avec le type de cellule cultivé. Les fibroblastes préfèrent plus d'un pH élevé (7.4-7.7), alors que les variétés de cellule sous-cultivées exigent pH acide (7.0-7.4). La plupart de milieu de culture se fonde sur le bicarbonate de soude (NaHCO3) et le système de CO2 pour l'amortissement. La concentration en CO2 dans la phase gaseuse devrait être équilibrée avec la concentration en bicarbonate de soude dans le milieu de culture. Dans ce cas, la capsule de culture cellulaire ne devrait pas être vissée trop fortement pour assurer l'échange de gaz. Cependant, après stockage pendant une certaine période, le pH du système de tampon augmentera avec la volatilisation de CO2. Actuellement, la solution de culture devient rapidement pourpre quand la cellule est sous-cultivée et soufflée, rendant les cellules cultivées avec ce milieu de culture difficiles à survivre. Même si elle survit, l'activité elle est également très basse, et le taux de prolifération est très lent. Ajouter HEPES à la solution de culture peut éviter ce problème. HEPES peut être employé comme tampon pour remplacer le bicarbonate pour éliminer la limitation de l'environnement de culture de CO2 de forte concentration. La concentration finale du tampon de HEPES utilisée est généralement 10-25mM.

Comment employer HEPES :

1. HEPES peut être directement ajouté à la solution préparée de culture à la concentration exigée, et être alors stérilisé par filtration. Ajoutez 2,38 grammes de HEPES par 1000ml de solution de culture, ajustez le pH sur 7,2 avec du NaOH de lN après la dissolution, filtrez et le stérilisez et l'utilisation actuellement, la concentration en utilisation de HEPES est 10 Mmol/L.

2. Elle peut également être préparée dans la solution de stockage de 100 x (l mole/l). Avant emploi, 99ml de solution de culture est ajouté à la solution de stockage de lml, et la concentration finale d'application est toujours 10mmol/L. l mole/l (méthode de préparation de solution courante de 100 x) HEPES : dissolvez 23.8g HEPES dans l'eau double-distillée par 90ml, ajustez le pH sur 7.5-8.0 avec du NaOH 1N, puis le diluez à 100ml avec de l'eau, filtre et stérilisez, et distribuez les fioles (2ml/bottle), le magasin à 4℃ ou le -20℃.

Biochimique de Desheng rappelé que quand utilisé comme tampon pour la culture cellulaire, HEPES dans le milieu de culture exposé à la lumière visible pour plus que 3h produira le peroxyde d'hydrogène qui est toxique aux cellules. On lui recommande que le milieu de culture soit stocké dans l'obscurité.