Avantages du biobuffer HEPES dans la culture cellulaire

HEPESest une préparation biochimique importante dans l'industrie biochimique. Il est considéré comme l'un des tampons importants dans le domaine de la recherche biologique.Acide N-hydroxyéthylpipérazine-1-éthanosulfoniqueL'acide zwitterionique est un acide faible, souvent utilisé comme tampon zwitterionique et comme intermédiaire pharmaceutique dans l'industrie chimique organique.Il est souvent choisi comme tampon pour la culture cellulaire en raison de ses avantages:

Emplacement et produits tampons de Desheng

1La capacité de décomposition du HEPES peut être augmentée avec l'augmentation de la température et affaiblie avec la diminution de la température, mais par rapport à d'autres tampons,sa constante de décomposition ne change pas beaucoup avec la température, ce qui rendPuffer HEPESLe tampon peut contrôler une plage de pH constante pendant une période plus longue et n'a pas d'effet toxique sur les cellules.

2Le pH requis pour la plupart des cellules est de 7,2-7.4, le HEPES a une bonne capacité tampon dans cette plage, mais la valeur optimale du pH varie selon le type de cellule cultivée.Les lignées cellulaires sous-cultivées nécessitent un pH acide (7La plupart des milieux de culture utilisent du bicarbonate de sodium (NaHCO3) et un système de CO2 pour le tamponnage.La concentration de CO2 dans la phase gazeuse doit être équilibrée avec la concentration de bicarbonate de sodium dans le milieu de culture.Dans ce cas, le capuchon du flacon de culture cellulaire ne doit pas être trop serré pour assurer l'échange de gaz.

Cependant, après un certain temps de stockage, le pH du système tampon augmente avec la volatilité du CO2.la solution de culture devient rapidement violette lorsque la cellule est sous-cultivée et souffléeMême si elle survit, son activité est également très faible, et le taux de prolifération est très lent.L'ajout de HEPES à la solution de culture peut éviter ce problèmeLe HEPES peut être utilisé comme tampon pour remplacer le bicarbonate afin d'éliminer la limitation de l'environnement de culture de CO2 à forte concentration..

Comment utiliser HEPES:

1L'HEPES peut être directement ajouté à la solution de culture préparée à la concentration requise, puis stérilisé par filtration.régler le pH à 7.2 avec lN NaOH après dissolution, filtrer et stériliser et utiliser À ce stade, la concentration d'utilisation du HEPES est de 10 mmol/L.

2Avant utilisation, 99 ml de culture sont ajoutés à lml et la concentration finale est toujours de 10 mmol/L.méthode de préparation de la solution de base de l'HEPES (l mol/L (100 x): dissoudre 23,8 g d' HEPES dans 90 ml d' eau double distillée, régler le pH à 7,5-8,0 avec 1N NaOH, puis diluer à 100 ml d' eau, filtrer et stériliser, et distribuer les flacons (2 ml/ flacon), conserver à 4°C ou -20°C.

Desheng Biochemical rappelle que lorsqu'il est utilisé comme tampon pour la culture cellulaire,L'HEPES dans le milieu de culture exposé à la lumière visible pendant plus de 3 heures produira du peroxyde d'hydrogène toxique pour les cellulesIl est recommandé de conserver le milieu de culture dans l'obscurité.