99,5% le phénol saturé par Tris a formulé la couleur CAS.77-86-1 blanche

Comment est le phénol saturé par Tris a formulé la couleur CAS.77-86-1 blanche

Tris a saturé le phénol est un liquide transparent jaune-clair, la couche inférieure est la phase de phénol, et la couche supérieure est la solution tampon pH>7.8 d'acide chlorhydrique de Tris. C'est phénol redistilled saturé avec du Tris-HCL (pH 8,0). Il a une odeur piquante et contient l'hydroxyquinoléine de l'antioxydant 8. Tris a saturé le phénol est employé pour séparer l'ADN.

La configuration de Tris a saturé le phénol : Sortez le phénol redistilled du réfrigérateur, placez-le à la température ambiante, et puis fondez dans un bain d'eau 68°C. Ne le mettez pas dans un bain d'eau 68°C immédiatement pour empêcher le verre d'éclater. Ajoutez l'hydroxyquinoléine 8 à 0,1% et l'éthanol de β-mercapto à 0,2%, (solution courante 14.4MOL/ML), se mélangent bien, la solution tourne jaune, se renverse la dans un entonnoir separatory (peut également être effectué dans un becher), ajoute 1MOL/ML Tris (PH8.0) d'autres dissolvants, le répète après mélange, l'a laissé se tenir toujours jusqu'à ce qu'il sépare ; la libération le liquide jaune inférieur de phénol, jettent la couche supérieure, ajoutent Tris solide au sujet de 1g/100ml, secouent bien, enlèvent la phase de l'eau, ajoutent le   0.1MOL/ML Tris (PH8.0) pour équilibrer plusieurs fois, à pH 8,0, 0.1MOL/ML Tris (PH8.0) stocké dans une bouteille brune à 4 degrés.

Le lysate de tissu, s'assurent que le pH est environ 8,0 (ajoutez 0,1 volumes de Tris-HCL de 1M, pH 8,0, l'ajustent sur environ 8,0), et puis ajoutent 0,5 volumes de Tris a saturé le phénol (mis de côté pendant l'utilisation, enlevez l'utilisation inférieure de phase de phénol. La couche supérieure est une solution Tris-HCL pour empêcher le phénol d'entrer en contact avec l'air et pour ralentir l'oxydation du phénol), 0,5 volumes de chloroforme : alcool isoamylique (24 : 1), secousse pendant 10 secondes et puis bain de glace pendant 15 minutes. Après centrifugation, prenez la phase de l'eau (couche supérieure) et ajouter un volume égal d'isopropanol pour précipiter l'ADN, rincez-cela avec de l'éthanol de 75%, et dissolvez-cela dans une quantité appropriée de TE pour une utilisation ultérieure.

Tris a saturé le phénol généralement a un pH plus grand que 7,8 et est employé pour l'extraction d'ADN. Parmi eux, le phénol est un dénaturant fort de protéine, qui peut dénaturer et précipiter des protéines dans les cellules ou les tissus. La fonction principale de Tris est d'empêcher et arrêter l'oxydation des phénols. Si des phénols sont oxydés, des quinones (deux anneaux de benzène) seront formées. Contient les radicaux libres forts, qui peuvent endommager la structure des acides nucléiques. En même temps, puisque la valeur du pH est plus grande que 7, l'ADN a lieu pendant la phase de l'eau et l'ARN a lieu pendant la phase organique dans un environnement alcalin, de sorte que le surnageant soit séparé et l'ADN puisse être obtenue.

Tris a équilibré le phénol est fortement corrosif, ainsi évitez le contact cutané ou l'inhalation. S'il tourne rouge ou brun, il indique que l'oxydation s'est produite et elle ne peut pas être employée.

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