L'électrophorèse de gel d'agarose est une méthode utilisée généralement pour l'isolement, l'identification et la purification des fragments d'ADN. Quand les molécules d'ADN nagent en gel d'agarose, elles ont l'effet de charge et l'effet de tamis moléculaire. Les molécules d'ADN sont négativement - chargé dans la solution de pH au-dessus du point isoélectrique et le mouvement à l'électrode positive dans le champ électrique. En raison de la structure répétitive de l'épine dorsale de glycophosphate, le même montant d'ADN bicaténaire a presque la même charge nette, ainsi elles peuvent se déplacer à la direction positive à la même vitesse.
Les différentes concentrations du gel d'agarose peuvent séparer des fragments d'ADN de 200bp à 50kb. Dans la solution d'agarose, la basse concentration du bromure d'ethidum (eb) a été ajoutée dans la solution d'agarose. La bande d'ADN de 10NG a pu être détectée sous la lumière UV. Dans le champ électrique, négativement - l'ADN chargée a émigré à l'anode dans pH8.0.
Le gel d'agarose a les caractéristiques suivantes :
(1) la taille moléculaire de l'ADN dans la matrice de gel est inversement proportionnelle à la valeur du logarithme bas, et plus la molécule est grande, plus la migration est lente.
(2) la concentration d'agarose dans une taille spécifique de molécule linéaire d'ADN est différente du gel d'agarose dans différentes concentrations. Le logarithme de la mobilité électrophorétique (u) de l'ADN est linéairement rapporté pour gélifier la concentration (t).
(3) quand la tension est basse, le taux de migration de fragments linéaires d'ADN est proportionnel à la tension appliquée. Cependant, avec l'augmentation de l'intensité de champ électrique, la mobilité des fragments d'ADN avec différents poids moléculaires augmentera dans différentes gammes. Avec l'augmentation de la tension, la portée efficace de séparation du gel d'agarose sera réduite. Afin de maximiser la résolution des fragments d'ADN plus grands que 2KB, la tension appliquée ne devrait pas dépasser 5V/cm.
(4) le comportement électrophorétique de l'ADN de la température d'électrophorèse dans l'électrophorèse de gel d'agarose n'est pas affecté par la température de l'électrophorèse. Le taux de migration relatif de fragments d'ADN de différentes tailles ne change pas de manière significative entre 4 et 30 degrés, mais le gel avec la basse concentration de 0,5% ou le bas gel de point de fusion est relativement faible, de préférence à 4 degrés.
(5) le bromure d'éthidium incorporé par colorant de colorant fluorescent a été employé pour détecter l'ADN en gel d'agarose. Le colorant a été enfoncé dans les paires basses empilées et l'ADN circulaire ovale et entaillée, le rendant plus rigide et réduisant la mobilité linéaire de 15%.
(6) la composition du tampon d'électrophorèse de concentration ionique et sa concentration ionique affectent la mobilité de l'électrophorèse d'ADN. Faute d'ions, tels que l'abus de l'eau distillée pour préparer des gels, la conductivité est des mouvements minimaux et d'ADN à peine. Dans le tampon élevé de concentration ionique (tel que le tampon d'électrophorèse de 10 x), la conductibilité est production de chaleur très élevée et évidente.
L'électrophorèse de gel d'agarose est également utilisée généralement en isolation et l'identification des acides nucléiques, tels que la production de carte de ribonucléase d'identification d'ADN, de restriction d'ADN, etc. en raison de son opération commode, l'équipement simple, la petite dimension de l'échantillon et la haute résolution, cette méthode a devenu des méthodes expérimentales communes dans la recherche en matière de génie génétique. Le kit d'électrophorèse de gel d'agarose contient 10 préformations d'agarose, la solution rapide à haute tension 15mL d'électrophorèse, le chargement buffer6x d'ADN 200 L, les ciseaux et les manuels d'utilisation, avec 8 le trou 6*6, 6 le trou 6*6, 13 le trou 6*12, 18 le trou 6*12 et d'autres caractéristiques.
